Kantaron Bitkisinde Myrosinaz Enziminin Tanımlanması, Enzim Üzerine Kozmetik, İlaç Etken Maddelerinin Etkisi
Hazırlayanlar:Nazan DEMİR, Ülkü Kaplan
Proje Özeti
Myrosinaz (Tiyoglikozid glukohidrolaz, EC 3. 2. 3. 1), glukozinolat moleküllerini hidrolizlemekte ve glukoz ve aglikon grupları ürün olarak açığa çıkmaktadır. Bu çalışmada Mersin yöresinde doğal olarak yetişen ve şifalı olarak bilinen kantaron (Hypercium perforatum L. ) bitkisinden myrosinaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Enzim 3 basamakta saflaştırıldı. ilk basamakta amonyum sülfat çöktürmesi yapıldı, 2. basamakta Sephacryl S-200 anyon değiştirici kromotografisi kullanıldı ve 3. basamakta ise concavalin A sepharose afinite kromotografisi kullanılarak enzim saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin saflığını kontrol etmek için SDS-PAGE elektroforezi uygulandı. Enzimin optimum pH ve sıcaklık değerleri tespit edilerek sinigrin substratı için Km ve Vmax değerleri belirlendi. Enzim aktivitesi üzerine Mg2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Fe3+ (10mM, 1mM ve 0, 1mM) katyonlarının ve askorbik asit, EDTA ve SDS (10mM, 1mM ve 0, 1mM) bileşiklerinin etkileri araştırıldı. Bunlara ek olarak kozmetikte kullanılan panteol, cephalotin, betamethasone, linoleik asit ve E vitamininin (10mM, 1mM ve 0, 1mM) ve cilt kanseri tedavisinde etkili olan TA1, TA2, TA3, TA4, TA5, TA6, TA7, TA8, TA9 ve TA10 (500 ppm) moleküllerinin etkileri araştırıldı. Sonuçlar canlıların bu zararlı UV ışınlarından hem korunması, hem de cilt kanseri oluşumundan sonra tedavi aşamasında, ilaç ve güneşin zararlı ışınlarından koruma amaçlı kozmetiklerin yapımında, myrosinaz enzimi içeren bitki ekstraklarının veya saf enziminin çok faydalı olabileceğini gösterdi.