Serum ve Plazmadan Albumin ve IgG Uzaklaştırılmasını Sağlayan Katı Faz Zenginleştirme Sistemleri
Hazırlayan: Rıdvan SAY, Anadolu Üniversitesi, Fen Fakültesi Kimya Bölümü,
Sibel BÜYÜKTİRYAKİ Anadolu Üniversitesi, Bitki, İlaç ve Bilimsel Araştırmalar Merkezi
(AUBİBAM) / Arzu ERSÖZ, Anadolu Üniversitesi, Fen Fakültesi Kimya Bölümü
Proje Özeti:
Serum ve plazma hastalık durumunu yansıtma derecesi ve örneklerin kolay alınması
nedeni ile hastalık biyolojik belirteçlerinin belirlenmesi için sıklıkla kullanılan
kaynaklardandır. İnsan serum proteinleri % 80 oranında albumin ve immunoglobulin G
(IgG) içermekle birlikte oldukça düşük oranda da enfeksiyon, kanser, kardiyovasküler
ve Alzheimer hastalıklarının belirlenmesini sağlayan biyoloijk belirteçleri içerir. Yüksek
oranda ve derişimde (mg/ml) yer alan bu proteinler biyolojik belirteçlerle girişim
yapmakta ve düşük derişimde (ng/ml-pg/ml) bulunan proteinlerin hastalığın teşhisinde
tanımlanmasını engellemektedir. Biyolojik belirtecin zenginleşmesini ve belirlenmesini
sağlamak için albumin ve IgG proteinlerinin uzaklaştırılması oldukça önemlidir. Bu
amaçla son yıllarda insan serumundan bu proteinlerin uzaklaştırılması için çeşitli
yöntemler geliştirilmektedir. Bu yöntemler arasında afinite kromatografisi seçici ve
tek basamakta ayrım sağlaması açısından avantajlıdır. Afinite ligandı olarak Cibacron
Blue boya ligandının ve Protein A’nın kullanılması sırası ile albumine ve IgG’ye yüksek
seçicilik sağlar. Ayrıca bu afinite ligandlarının nanopartikül yüzeyine immobilizasyonu
bu proteinler için oldukça yüksek adsorpsiyon kapasitesine ulaşılmasını sağlar.
Yapılan çalışmada, Fe2O3 nanopartikülünün yüzeyine Cibacron Blue F3GA ve Protein
A immobilizasyonuyla aynı anda hem albumin ve hem de IgG ayrımını sağlayabilecek
katı-faz sistemi hazırlanmıştır. Çalışmada ilk önce Fe2O3 nanopartiküllerinin yüzeyi
fonksiyonellendirilmiş ve afinite ligandları ile bağlanmıştır. Afinite ligandlarının
nanopartikül yüzeyine bağlanması spektrofotometrik yöntemle incelenmiştir. Hazırlanan
katı destek sulu çözeltide tekli ve aynı anda albumin ve IgG uzaklaştırılmasında
kullanılmıştır. Tekli çözeltide albumin ve IgG için sırası ile 1149 mg/g ve 1175 mg/g
maksimum adsorpsiyon kapasitesine ulaşılırken; ikili sulu çözeltide albumin için 1132.07
mg/g, IgG için ise 566.04 mg/g maksimum adsorpsiyon kapasitesine ulaşılmıştır. Katı
desteğin albumin ve IgG bağlama kapasitesi 6784 M-1 ve 12857 M-1 olarak bulunmuştur.
Katı destek serum çözeltisinden albumin ve IgG uzaklaştırılması için kullanıldığında
desteğin her iki protein için sulu çözeltiye göre maksimum adsorpsiyon kapasitelerinde
artış elde edilmiş ve sırası ile 3461.54 mg/g ve 2307.69 mg/g olarak bulunmuştur.
Hazırlanan katı destekle sulu çözeltiden, serum ve farklı oranda seyreltilmiş serumdan
albumin ve IgG uzaklaştırılması SDS-PAGE yöntemi ile de desteklenmiştir. Hazırlanan
katı desteğin ardı ardına 10 kullanım sonrasında adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir
değişim elde edilmemiştir.